Diabetologia：激活但功能受损的清醒Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝细胞内自身抗躯到显现1DF乳癌病理征状的成效率在儿童时期就有很好的叙述，多个肝细胞内自身抗躯无征状的儿童之中有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的儿童这一比重增加到84%。相比较之下，占病理1DF乳癌一半以上的DF1DF乳癌的胃癌必要还没有得到充分的研究工作。

越发多的人开始常用有系统系统来定义1DF乳癌的成效：生物躯在显现多种肝细胞内自身抗躯时踏入第1收尾，显现血糖异常时踏入第2收尾，显现征状时踏入第3收尾。一些多发肝细胞内自身抗躯无征状的生物躯，在1期和2期，成效较非常慢，并转变为胃癌的1DF乳癌。我们前叙述了一三组在首次探测到多种肝细胞内自身抗躯取样后非常少10年无乳癌的极非常慢成效者，这三组患者人数少，但不同之处非常明确。随后，我们找到肝细胞内自身抗原特异性CD8+T细胞内反应该在成效平稳的患者之中基本上不实际上，但在近期胃癌和仍然实际上的乳癌患者之中很容易探测到。这可能确实，与成效患者相比较，这些患者免疫反应该的调节弱化。

早期研究工作确实，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但乳癌患者实际上一些新功能不足之处，其之中包括对IL-2的反应该能力也降低。此外，乳癌患者之中的效应该CD4+T细胞内可能对调节非常具抵抗性，表现为效应该T细胞内的抑止增强，自然转化成的Treg和躯外转化成的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内之中IL-2反应该增强。本研究工作的最终目标是叙述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极平稳成效者之中的不同之处，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以老年人为基础的纵向研究工作，在21岁以下发病的患者亲属之中核查1DF乳癌的可怕环境因素。我们前叙述了仍然平稳成效者的不同之处，他们保持多重肝细胞内自身抗躯无征状高达10年，但没有显现乳癌的病理征状，非常慢性或非来受虐免疫。随后，10名再次保持无乳癌并愿意提供大量血液取样的平稳成效者纳入T和B细胞内新功能比对。在迄今的研究工作之中，8名非常慢成效者(SP三组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肝细胞内自身抗躯无征状。所有的参与者都属于1DF乳癌成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞内自身抗躯对某些抗原的无征状反应该，然而，一名患者从未属于2期非常少6年，但没有显现病理征状，一名患者被确诊为乳癌，该受测者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在比对之中对该NAD来进行了之外评核。分立外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多变量流式细胞内忍术和T细胞内抑止试验车评核NAD之中Treg的增益、表DF和新功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、总括和回归)来进行无委派聚类比对，评核Treg表DF。

结果：与生活品质NAD相比较，来自非常慢成效躯的潜意识CD4+T细胞内的委派聚类显示，激活的潜意识CD4+ Treg增益增加，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来增加有关。一名HbA1c升高的患者与成效平稳者和匹配的对照三组相比较，Treg谱有所不同。新功能比对确实，与生活品质NAD相比较，来自平稳成效躯的Treg抑制的CD4+效应该T细胞内抑止明显受损。表现为对效应该CD4+T细胞内CD25和CD134表达出来的抑止增加。

绘出1 深入的表DF比对显示，CD4+Treg亚DF在非常慢成效函数调用之中增加。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物表达出来断定出10个元簇:潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)常用9个不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，非常大的元空降兵(10个元空降兵)在节点三组周边上色。每个节点之中的年糕绘出声称单个标明的表达出来高至。(b)每个元聚类的热绘出，以显示总躯标明表达出来。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较总质量为每个metacluster筒本站绘出(总质量> 0.05%)考虑到为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞内(l)。深蓝色白点代表捐赠者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 常用CITRUS的预测模DF证明，Treg增益的增加是成效平稳的标志。评定门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来来进行分立，建模FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及NADSP 606(深蓝色)之中CD25+ cd127的增益汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的筒本站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度上色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用相互间的不同。(j)筒本站绘出显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组之中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相较总质量(比重)。(k)直方绘出显示每个簇的表DF(粉红色)和Treg标明相较表达出来与或多或少表达出来(粉红色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。或多或少与所有其他簇之中标明的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

绘出3 与生活品质献血者相比较，成效平稳者潜意识treg的GITR增加。每个潜意识CD4+T细胞内元簇(潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表达出来标明的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表达出来热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表达出来串联，显示直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(深蓝色)所有NAD包括，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表达出来，从评定门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深蓝色)串联，显示直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

绘出4 来自平稳成效的CD4+ treg细胞内控制效应该CD4+T细胞内的能力也降低。SP三组用粉红色的本站和白点声称，HD三组用黑色的本站和白点声称，深蓝色的本站/白点声称NADsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，指导3天后来进行流式细胞内忍术探测。(a-d)与CD4+转发者相较应该的treg指导(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。常用无征状对照(激活的响应该细胞内不含treg)计算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 效应该CD4+T细胞内对平稳成效的T细胞内再造的抑止非常敏感。SP三组用粉红色的本站和白点声称，HD三组用黑色的本站和白点声称，深蓝色的本站/白点声称NADsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，指导3天后来进行流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出的假设是，来自平稳成效子的再造潜意识CD4+Treg在GITR表达出来之中得到了扩展和珍贵，忽视了进一步研究工作Treg在1DF乳癌风险生物躯之中的异质性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28